1.结果与讨论
理想的美媛馆套图下载蛋白质印迹聚合物应该具有良好的生物相容性, 可以特异性识别模板分子,并有一定的柔性,便于模板、溶剂分子能够在聚合物中顺畅扩散。 由于聚合物及蛋白质表面的酸、碱基团均会产生电离,其中部分带电基团将会配对、吸引,从而产生额外的识别作用。 在两性聚丙烯酰胺冰胶中,不但能够产生与蛋白质分子外形互补的空穴,而且由于酸、碱基团的静电作用,这种空穴还具有一定的“方向性冶或“极性冶,其中识别的蛋白质分子不但要满足特定的外形,还需要具有互补的电荷数目与分布。 少量酸、碱性单体的加入,显著提高了美媛馆套图下载冰胶聚合物对蛋白质分子的印迹选择性。
1.1 两性聚丙烯酰胺冰胶的表征
1.1.1 红外光谱
图 1 是聚合物 MIP-1(模板为溶菌酶)的红外光谱图。 因为源于相同配比的单体溶液,其它聚合物的实验结果与此类似。 图 1 中吸收峰的归属为:γO—H =3620 cm -1 ,γN—H =3294 cm -1和3203 cm -1 ,γC—O = 1683 cm -1 ,γN—H =1537 cm-1,γC—H =1454 cm-1,γC—N =1396 cm-1 和1317 cm-1,γC—O =1213 cm -1 。 羧基、氨基吸收峰的同时存在,证明了聚合物的两性特征。

1.1.2 毛细管柱形貌
聚丙烯酰胺具有优良的生物相容性,在生物学领域已得到广泛应用。 本研究合成的两性聚丙烯酰胺冰胶均为白色大孔材料,能被水和油脂分别浸润,既可用于水相体系,也能使用有机溶剂处理,因此具有广泛的适应性。
图 2 是聚合物 MIP-2(模板为胃蛋白酶)整体柱的扫描电镜图,其大孔特征十分明显。 整体柱通透性良好,传质阻力很低,十分有利于生物大分子(蛋白质)的印迹与洗脱。
1.1.3两性聚丙烯酰胺冰胶的美媛馆套图下载等电点
酸碱滴定可以进一步揭示冰胶材料的两性特点。 如图 3 所示,聚合物 MIP-1 的滴定曲线与常规溶液中的强酸-强碱滴定不同,在 pH 7. 0处未显示出任何突跃。 在pH 8. 0 ~2. 0 范围内,整个曲线呈现缓慢变化的特征,充分说明中和反应是逐步进行的。在 pH 4. 0 ~5. 0 范围内,存在一个不太明显的平台。 根据两性电解质的性质,认为此处存在一个缓冲区,源于聚合物上羧基-氨基酸碱对的缓冲作用,由此也可判断聚合物的等电点约为 4. 5,同时表明聚合物酸(碱)性比较弱。 其它聚合物的滴定结果与图 3 类似,因为所有单体溶液的配比是相同的。


1.2不同蛋白质印迹效果的比较
本研究选择了美媛馆套图下载 5 个蛋白质进行印迹实验(表 1)。 根据分子量、等电点的不同,可以将蛋白质归结为不同的类型。 溶菌酶分子量最小(14kDa),等电点最大,属于小分子量的碱性蛋白质。 酸性的胃蛋白酶分子量稍大,约为 35 kDa。 卵清蛋白、血红蛋白分子量分别为 43 和64kDa,等电点分别为 4. 7 与 6. 3,属于中等分子量的弱酸性蛋白质。 γ-球蛋白分子量高达210 kDa,其等电点为 7. 3,是典型的中性大分子蛋白质。 总之,本实验所选蛋白质分子量在 10 ~ 200 kDa之间,等电点介于 1. 0 ~ 11. 0,具有比较广泛的代表性,可用于考察聚合物的印迹适应性。
从毛细管电色谱结果(图 4)可见,虽然蛋白质性质差异极大,但是它们在 NIP 柱中的保留时间都比较小,数值也很接近,介于 2 ~5 min 之间,说明聚合物的非特异性吸附相当小。 由于 MIP 柱中存在特异性识别位点,蛋白质的保留时间变长,且不同蛋白质间的差异极大。 模板分子与 MIP 间的相互作用效果可以用印迹因子(Imprinting factor, IF)来mygirl美媛馆表示,其计算公式为: IF=k MIP / k NIP
其中, k MIP 和 k NIP 分别是模板分子在 MIP、NIP 柱上的美媛馆套图下载保留因子,其计算公式为 k = t R / t 0 , t R , t 0 分别是蛋白质、硫脲的保留时间。

由表 2 中的计算结果可知,利用同一配方的单体溶液,可以合成出对所选5 种蛋白质均有效果的印迹聚合物,说明两性聚丙烯酰胺冰胶能够适应不同性质的模板分子,是很好的蛋白质印迹材料。 溶菌酶具有最高印迹因子 7. 0,推测与其碱性最强有关,因为聚合物是弱酸性的。 从其它蛋白质的结果可知,印迹因子大小顺序为:卵清蛋白>血红蛋白>胃蛋白酶>γ-球蛋白,与其等电点顺序并不一致。 另外从分子量大小来美媛馆视频合集看,印迹因子与模板分子大小也未显示出关联性。 上述结果说明,蛋白质分子在两性聚丙烯酰胺冰胶中的印迹效果,并不单纯决定于功能单体的数量与比例,而是与具体模板分子的总体性质,尤其是分子形状、表面电荷等有关。 蛋白质分子在聚合物中形成的印迹位点是个性化的,具有非对称性特征。

2.结 论
采用“两性聚合物处理两性生物大分子冶策略,合成的两性聚丙烯酰胺聚合物可以成功印迹分子量为 10 ~200 kDa、等电点为1. 0 ~11. 0之间的亲水性蛋白质。 这种普适性使得所制备的分子印迹材料可以用于处理不同标准蛋白质或者复杂样品,可能成为分离、分析蛋白质的“通用冶材料,并有望在分子识别、分离科学、生物催化等领域发挥更大的作用。
来源:分析化学《两性聚丙烯酰胺冰胶对蛋白质分子印迹的广泛适用性》
作者:杨 春,周兴璐,刘亚茹,张 燕,王 建,田莉莉,颜亚楠
(扬州大学化学化工学院,扬州 225002)